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摘要：本文对一规模鸡场50日龄左右的肉鸡突然出现眼睛流泪、失明，甚至死亡的疫情进行了细菌分离鉴定和鸡毒支原体的PCR检测。结果证明鸡群存在鸡毒支原体感染，测定感染菌株脂蛋白基因与2016年提交来自我国鸡肺脏的菌株QHDT-1具有100％的同源性。采取降低鸡群密度，饮水中添加3天多西环素后再添加4天泰万菌素的措施，及时控制了疫病的发展，最后就对该病的防控进行了分析讨论。

关键词：肉鸡；鸡毒支原体；检测；分析

  鸡毒支原体（Mycoplasma Galliscepticum，MG）是危害养鸡业的重要病原，在鸡群具有较高的感染率^[1-2]，我国鸡群感染阳性率可达到50％~80％^[3]。鸡在4-8周龄时对该病原最为敏感^[4]。2019年9月，邵阳某鸡场一批50日龄左右的鸡，6,000羽左右，地面饲养，白天室外放养，晚上关入鸡舍。一天早晨突然发现死亡40多羽，根据临床情况怀疑MG、副禽嗜血杆菌、大肠杆菌3种病原中的一种或几种混合感染，采集病料样本进行了实验室的检测分析，并采取针对性防控措施控制了疫情，现报告如下：

1 材料

1.1 病料：鸡鼻窦粘液、喉气管及肝脏样本。

1.2 主要试剂：DNA 提取试剂盒（柱式病毒DNAout）、PCR酶mix3.0，购于北京天恩泽生物科技有限公司；巧克力营养琼脂购自贝瑞特生物技术(郑州)有限责任公司。

2 方法

2.1 病鸡的临床、解剖观察

     首先对发病鸡群进行临床观察，然后取3只临床表现具有代表性的鸡，按常规方法进行解剖观察并记录。

2.2　细菌分离鉴定

  用无菌接种环钩取鼻窦分泌物、肝脏样本，分别划线接种至巧克力营养琼脂，37℃温箱中培养36h，观察细菌生长情况，如有优势菌落生长则进行进一步的细菌纯培养鉴定。

2.3 病毒检测

  按照DNA提取试剂盒说明书提取解剖鸡鼻窦、喉气管分泌物基因组DNA，然后用参照文献^[5]合成的鸡毒支原体检测引物，以提取的基因组做为模板，进行PCR检测。PCR体系为：PCRMix 25 µL、纯水21 µL、上游引物1 µL、下游引物1 µL、模板2µL。PCR退火温度为50℃，PCR 完毕后进行产物的电泳鉴定，并将阳性产物送北京擎科生物技术有限公司进行序列测定。

2.4 防控

    根据临床观察结果拟定初步方案进行防控，待实验室检测结果明确后再考虑是否需要制定新的防控措施。

3 结果

3.1 临床解剖观察结果

  临床观察发病鸡群，有少量鸡存在一侧或两侧眼睛流泪或充满干酪样渗出物，失明（图1、2），但未发现明显甩头和呼吸异常。挤压死亡病鸡鼻孔可见大量粘液流出（图3），喉部有干酪样渗出物、气管内充满粘液（图4），其它病变不明显；单侧眼睛失明但尚未死亡的病鸡，发现除眼睛出现上述问题、鼻窦充满粘液外（图5），气管以及其它脏器均无明显病变。

3.2 细菌分离鉴定

  无菌操作取眼睛分泌物、鼻窦粘液划线接种巧克力营养琼脂，37℃培养48小时。结果眼睛分泌物接种的培养基上仅长出几个大小不一的菌落，未分离到大量直径较大、灰白色、类似于大肠杆菌^[6]的菌落；鼻窦粘液接种的培养基上，除长出一些大小、形态不一的菌落外，无菌落形态一致的优势细菌生长，未见到小而半透明，针尖状，类似副鸡嗜血杆菌^[6]的小菌落。

3.3 鸡毒支原体的PCR检测

  取鼻窦及气管分泌物提取DNA基因组，并以提取的基因组为模板，采用参照文献^[5]合成的MG检测引物进行PCR扩增，结果从3个样本均扩增出了预期大小的特异性条带（图6）。

  将阳性PCR产物送北京擎科生物技术有限公司进行序列测定。结果来自3个样本的序列同源性为100％，将其中1个样本测出序列上传至GenBank，登录号为MN526743。该序列与GenBank登录的其它MG菌株相应片段同源性见图7。由图可见从病料样本中测出的MG脂蛋白序列与2016年提交，来自中国病鸡肺脏的菌株QHDT-1（登录号：KY088075）具有100％的同源性。 

3.4 防控

  首先根据临床初步诊断结果，采用对MG、副鸡嗜血感染、大肠杆菌均有效的广谱抗生素多西环素（呼康灵或新立喜）+新力爽，饮水添加饲喂，同时适当降低鸡群密度，3d后，没有再出现死亡病例，也未见到眼睛失明病鸡数量的增加，但眼睛已失明的鸡未康复。实验室检测结果证明无明显副鸡嗜血杆菌和大肠杆菌感染后，再改用对支原体有特效的泰万菌素饲喂4d。除已出现眼睛失明的病鸡外，没有再发现鸡群中出现类似异常情况。

4 讨论与分析

  本文对一规模鸡场鸡群突然出现死亡、少量鸡只眼睛流泪、一侧眼睛失明的病例进行了临床和实验室检测。结果从眼睛分泌物仅培养出几个形态不一的菌落，表明样本中没有大量可生长于巧克力营养琼脂的细菌存在，说明该病例可能并非大肠杆菌引起的全眼球炎；从鼻窦粘液没有培养出形态一致，数量上具有优势的菌落，更未发现类似副鸡嗜血杆菌的菌落，同样可以排除副鸡嗜血杆菌引起的鸡传染性鼻炎。但从气管分泌物均检测到MG，可以推断该次鸡群出现发病应该主要是由MG感染引起。结合临床使用主要针对支原体的药物，很快控制了疫情，进一步证明该次鸡群发病的主要原因。此外，测定的脂蛋白基因序列比对结果表明，样本中MG与来自中国病鸡肺脏，2016年提交至GenBank的菌株QHDT-1具有100％的同源性，该毒株在我国鸡群是否属于一个流行较广的毒株尚需进一步调查。

    MG除可通过鸡蛋传播^[7]外，上呼吸道和黏膜是其自然感染的通道。其主要寄生在鸡的呼吸道和结膜表面，上呼吸道和结膜是气溶胶和飞沫中菌株进入机体的通道，免疫抑制和较差的环境条件或其他应激因素可能有助于诱发严重的MG疾病^[8]。因此鸡场做好饲养管理，提高鸡群健康水平，并且适当降低鸡群密度，在做好防寒工作的同时，尽量减少鸡舍空气中可伤害上呼吸道黏膜的氨气、硫化氢，以及可携带MG的飞沫，对于MG的防控具有非常重要的作用。此外，鸡MG可产生耐药性^[8]，有条件的鸡场可以考虑进行药物敏感性检测，选用敏感药物进行防控，如果未进行药物敏感性检测则建议选用2-3种敏感药物轮换使用，以防MG的耐药性影响疾病防控效果。

参考文献：

[1] 齐新永,张维谊,徐锋,等.上海地区鸡毒支原体感染抗体的血清学调查[J].上海畜牧兽医通讯,2014(3):52-53.

[2] 孔意端,陈峰,廖理克,等.广东地区鸡毒支原体血清学调查[J].广东畜牧兽医科技,2010(1):23-25.

[3] 宁宜宝.动物支原体病预防与控制的研究进展[J].中国兽药杂志,1999(1): 45-48.

[4] 陈溥言.兽医传染病学[M].第六版,北京:中国农业出版社,2015.

[5] 谢芝勋,谢志勤,庞耀珊,等.应用多重聚合酶链反应同时检测鉴别鸡新城疫病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性喉气管炎病毒和鸡毒支原体的研究[J]. 中国预防兽医学报,2000(6):44-47.

[6] 陆承平.兽医微生物学[M].第3版.北京:中国农业出版社,2001:215,259.

[7] 隋兆峰,迟灵芝,杨明彩,等. 肉种鸡场孵化后期死胚禽支原体感染率调查[J]. 中国兽医杂志,2017(2):12-15.

[8]Y. M. Saif.禽病学[M]. 第11版.苏敬良,高福,索勋主译.北京:中国农业出版社,2005:825,830.

文章来源: 李熙，张古月等  中国动物保健 版权归原作者，向原作者致敬，文中观点，仅代表原作者观点，不代表本平台观点，分享给大家，仅供参考，请勿盲目，谢谢！

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