鸭坦布苏病毒病是 2010 年 4 月以来发生的一种新鸭病,主要危害种鸭及蛋鸭,一旦传入鸭场,能迅速感染全场种鸭或蛋鸭,导致产蛋率急剧下降,但死亡率较低。目前该病主要根据发病情况,剖检病理变化和实验室 PCR 来作出诊断。鸭大肠杆菌是严重危害养鸭业的病原之一,在卫生条件差、饲养管理不当及应激状态下容易引起鸭发病,特别是鸭感染病毒病时容易继发感染,加重病情,给养鸭业造成巨大的经济损失。现将一例种鸭发生鸭坦布苏病毒与鸭大肠杆菌混合感染的诊断报道如下。
1、发病情况及临床症状
2011 年 12 月 3 日,广西桂林某种鸭场产蛋种鸭开始发病,采食量减少,产蛋率下降到原来的50%,到 12 月 5 日有产蛋出现死亡,产蛋率降至10%。患鸭排稀薄粪便,呈白色、黄色或绿色。用抗病毒药物及抗菌药物治疗效果不佳,送检时已有 30%种鸭出现死亡。
2、病理变化
解剖送检病死鸭,可见鸭心包膜表面覆盖一层淡黄色纤维素性渗出物,与胸腔及心肌粘连,心包膜增厚;肝脏稍肿大,表面覆盖一层薄薄的白色纤维素性渗出物,容易剥离,肝脏实质较脆,呈红褐色;气囊浑浊增厚,表面有少量白色渗出物;卵泡、卵巢严重充血,出血,部分卵泡出现黑色坏死病变。
3、材料与方法
3.1 细菌分离与鉴定
无菌取患鸭肝脏划线于麦康凯平板上,37 ℃培养 24 h,挑单个菌落涂片进行革兰氏染色,观察细菌形态。同时取适量细菌接种于生化试验微量发酵管(葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、棉子糖、尿素、甘露醇、蛋白胨水、硫化氢、靛基质、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶、M.R、V-P 试验)37 ℃培养 24~72 h 观察并记录结果。
3.2病毒的鉴定
取出血、坏死的卵泡膜,按常规方法匀浆,反复冻溶3 次,按 DNA/RNA Isolation Kit(购自 OMEGA 公司 ) 使用说明提取组织 DNA 和RNA,RNA 按照 AMV 反转录酶(购自大连 TaKaRa生物工程有限公司)说明书进行反转录合成 cDNA。参照禽流感、鸭 I 型副黏病毒、鸭呼肠孤病毒、鸭坦布苏病毒、减蛋综合征病毒的检测引物用 PCRMaster Mix(2X)(购自 Fermentas 生物技术有限公司)进行PCR。PCR反应体系为 25 uL:PCR MasterMix(2X)12.5 μL,上下游引物各 0.5 μL,模板 2 μL,用水补充体积至 25 μL;反应程序为:95 ℃预变性5 min,按94 ℃ 30 s、53~56 ℃ 30 s、72 ℃ 30 s 进行35个循环,最后72 ℃延伸7 min结束反应,取5 uLPCR 产物在 1% 的琼脂糖凝胶上电泳观察 PCR结果。
4、结 果
1)经 37 ℃培养 24 h 后麦康凯平板上长出红色,圆形隆起,光滑的菌落。革兰氏染色后在显微镜下可见到两端钝圆的革兰氏阴性短杆菌,生化试验结果均符合大肠杆菌的生化特性,可确定该菌为大肠杆菌。
2)分别经禽流感、鸭 I 型副黏病毒、鸭呼肠孤病毒、鸭坦布苏病毒、减蛋综合征病毒特异性 PCR 扩增后,只有鸭坦布苏病毒阳性,且扩增的目的片段大小与预测的相符,为300 bp。
根据发病情况、临床症状、剖检病变及实验室检测结果,可确诊该病例为鸭坦布苏病毒与大肠杆菌的混合感染。
通过多个病例发现:鸭病解剖后大概为:1、脑炎 2、浆膜炎 3、气囊炎 4、病毒病或者说禽流感 5、鸭瘫痪 6、脾脏坏死 7、鸭子发烧等多种疫病混合感染后,又继发感染。(更具体的说明,如果需要了解请咨询魏治徽老师)
5、治疗方案
鸡鸭鹅病防治网禽病实战专家魏治徽老师,提醒各大养殖场必须引起重视,注意防控,加强管理,提前预防(用都好TM(特制板青颗粒A)+“新泰瑞”+“好得快”或“新力替”,在饲料里长期添加驰骋养殖安880效果更好)。具体症状与病情请电话咨询。
发病后:确实有效的防控方案(鸭黄病毒与大肠杆菌病综合防治“傻子”方案=1+1+1+1):“都好TM(特制板青颗粒A)” +“好得快”或“新力替”+“新力欣或新泰瑞”+“优免或新力爽或阿司匹林粉”,将全天用量集中1次在三个小时饮完,连用4-5天。对于个别严重的卧在地上不愿走动,基本不能喝水吃料的,用优免+新六甲或新力培联合皮下注射。
6、讨 论
鸭坦布苏病毒病是2010年以来发生的一种新疫病,病原学调查研究表明该病是由黄病毒科黄病毒属的一种新的黄病毒感染引起的,该病主要危害种鸭及蛋鸭,主要表现为采食量减少,产蛋率急剧下降,但死亡率很低,剖检病变以卵泡膜充血,出血,卵泡变形,液化为特征。目前主要依靠实验室 PCR检测对该病作出确诊。现在还没有有效的治疗药物及预防措施,对鸭坦布苏病毒病的防治主要靠加强隔离措施和消毒工作,以杜绝病原传入鸭场,对发病鸭群可以采取适当的支持性治疗,以提高鸭群的抵抗力。本实验室通过对送检病死鸭的剖检病变观察,细菌分离鉴定及病料 PCR 检测,确诊该病例为鸭坦布苏病毒与大肠杆菌的混合感染。由于 H5亚型禽流感病毒、H9 亚型禽流感病毒、产蛋下降综合征病毒、禽 I 型副黏病毒、呼肠孤病毒等,都能引起鸭产蛋下降,而鸭坦布苏病毒感染的死亡率一般较低,但继发细菌感染能导致较高的死亡率,在临床上容易误诊为其他疫病。大肠杆菌是一种条件性致病菌,在自然环境中广泛存在,鸭感染其他疫病是很容易发生继发感染,加重病情,给疾病的防治造成很大的困难。因此,在鸭坦布苏病毒病的防治过程中用敏感的广谱抗生素防止继发感染,以减少损失。
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