简介：应用禽流感胶体金对养殖场的禽流感新城疫病毒感染进行测定，并对一些情况进行了总结，同时对禽流感的防控提出了一些建议。

近年来，禽流感新城疫的流行给我国的养禽业（主要是蛋鸡业和肉鸡业）造成了极大的损失，特别是新的禽流感毒株（变异株）的产生和流行使得以前行之有效的疫苗的保护率大大降低甚至失效，更给养殖业造成了空前的损失和恐慌，许多商品代场、一些父母代场甚至个别祖代场都遭受了极为惨重的损失。同时这种能产生免疫逃逸的毒株对禽流感的防控工作造成了很大的困难，对兽医工作者的诊断工作也提出了更高的要求。广大兽医工作者本身特别是基层工作者和养殖场的技术人员也迫切需要一种能够快速诊断禽流感新城疫病毒的工具。

禽流感新城疫抗原胶体金快速诊断试纸以其快速准确、操作简单、对场地人员要求低、价格低廉等特点，已成为快速测定禽流感新城疫病毒的有力工具。对于禽流感来说，病毒分离和基因测定（PCR等）方法确定病毒往往需要几小时到几天的时间，且需要极其严格的设施、昂贵的设备和专门的人员，显然不利于应用到广大基层兽医部门和养殖场的诊断工作中。抗体监测（HI、ELISA）方法也由于毒株的免疫逃逸而导致测到的数据不准确或显示不出病毒的感染（鸡场中常出现的抗体平均滴度很好却出现大量死亡的情况），其参考价值也降低不少或不具参考意义。

目前世界上好的科研机构研制的普通型禽流感（H1~15）、禽流感H5、新城疫抗原胶体金试纸灵敏度已达0.031个血凝单位（HAU）、0.062个血凝单位和3×10³半数感染量（EID50），产品在2～30℃常温下可保存两年。顶尖的机构还能研制出一条试纸上有两个检测线能同时测到两种病毒，而且能保持同等的灵敏度，已能够完全满足基层兽医工作者和养殖场技术人员的需要了（日常许多病例中，粪便中的病毒有时高达10⁸EID50/g）。

三年来，我们及一些机构应用这些试纸做了大量的测定工作，并积累了一些经验，有了一些想法，今予汇报，请批评指正。

一、一些诊断情况

1、1禽流感新城疫测定的相关数据

在几个省范围内检测到的4800多例病例中，新城疫占65%左右，禽流感占35%左右，其中禽流感H5亚型感染占全体病例的15%左右。因我国禽流感暂时只有H5与H9亚型，所以不是H5的禽流感可以推定为H9，其中部分病例的基因测定和病毒分离工作也佐证了这一点。

这些病例中有一部分是禽流感与新城疫混合感染，其中禽流感H5与新城疫混合感染占总混合感染的30%左右。

这些数据不是平均发生的，虽然新城疫量大，但在某一段时间内测到的可能禽流感H5亚型居多，如08年的1月份。另外这些数据也可能不具有统计意义，因为使用这种手段的养殖场技术人员和门诊兽医在兽医总数中只是很小的部分，仅依赖于其本人对新技术新信息的敏感度和对产品的熟练掌握程度及由此而产生的信任程度和必要的资金支持。

1、2禽流感H5亚型的诊断情况

高灵敏度的试纸的好处不但在于家禽因禽流感正在大量发病且出现大量死亡时能快速测到，还在于没有多少眼观症状和剖检症状即在传染的潜伏期时就能测到，这就给禽流感的防控带来了宝贵的几天时间，另外现在由于大量使用疫苗，家禽身上所具有有效的抗体也能滞迟病毒的传染。

禽流感H5亚型病毒感染，在鸡群中早期发现且症状不明显大群有有效抗体滴度且免疫状态好时，个别病例有的只采取添加抗病毒药物、加强消毒和增加营养等辅助措施就能将病压下去，用试纸条检测整群就会发现病毒量越来越少（试纸条上检测线上的颜色与病毒量成正比，颜色越浅病越少）直到检测不到。但这种鸡群在群体状态下降时就有可能复发，提示病毒可能不能完全除净。

在总的禽流感H5亚型病毒感染的病例中，有20%的鸡场（含种鸡场）由于本身含有较高的抗体（大部分在2⁸以上）再通过一个鸡一个针头补打含禽流感H5Re—4株的疫苗就能取得较好效果，表现为死亡减下来和生产性能的恢复。有一部分没有打过Re—4株，比如只打过Re—1株或Re—5株的鸡群，均出现大的死亡率有的高达90%以上。这就提示这两三年来最少华北地区流行的一些毒株与Re—4有较大的相近性，而与Re—1和Re—5株相近性较差。有关专家的基因测定工作也证明了这一点，基因测序表明07年08年的毒株有一大部分在进化树上与Re—4相近，而与Re—1、Re—5株相距较远。而另外一些学者用SPF鸡做的攻毒试验也证明Re—4株产生的抗体对07年08年分离的毒株有较大的中和作用，而进化关系上较近的Re—1株和Re—5株产生的抗体对07年08年分离的一些毒株几乎没有作用。韩国方面提供的信息是对病毒的基因分析表明韩国08年分离的毒株与此前发病的越南的毒株是一致的（哪夹在中间的中国呢？）。

另外在禽流感疫苗有效（疫苗株对流行株有效覆盖）的前提下，抗体的高度与保护率成负相关。抗体本身就不理想的大部分鸡场在感染H5亚型禽流感后产蛋率下降和死亡率都比较大。这里面有两个情况，一个是大部分商品代蛋鸡场常在开产后不再打油苗，所以抗体大部分都不高；另一个是一些小型种鸡饲养场，虽然养得是种鸡，但观念同养商品代一样，做苗也不怎么认真，病一来同商品代几乎一样。这两类养殖场损失最大，占养殖总量的比例也最大。

当然这里面也有一些禽流感疫苗生产厂家生产的疫苗的部分指标如甲醛超标等问题。养殖场一打这种苗，产蛋鸡产蛋降得很厉害，一般下降一成到三成不等。所以商品代户也常有恐惧心理。不过随着一些问题的公开或半公开的曝光，事情还是会有进步的。

 09年的主要问题是个别种鸡场打H5Re—4和Re—5株抗体平均滴度高达2¹²和2¹¹，但仍出现降蛋死鸡的情况。用胶体金试纸能测到大量的流感H5病毒。这就意味着有可能有新的H5Re—4和Re—5毒株都不能完全覆盖的H5病毒。还有更不利的情况，有的种鸡场通报说他们场不光打H5Re—4和Re—5株的苗，还打07年08年分离的毒株做的苗，在抗体滴度都较高的情况下仍防不住禽流感，用胶体金试纸仍能测到H5病毒，而且能分离到毒株！提示09年的毒株仍可能有变化。

1、3  H9亚型禽流感的诊断情况

     低致病力禽流感H9亚型发病总数比H5亚型要多一倍，实际中可能更高。一般种鸡场的H9免疫要好，HI法抗体测量常在2¹⁰以上，发病的较少，主要发病大都集中在商品代养殖场，由于开产后就不再做流感苗，其H9抗体往往在230日龄就只有2⁴或更低，根本没有多少保抗力。一旦发病其产蛋不足以维持饲料成本，就会出现大批淘鸡现象。大额损失也由此而生。

    1、4  肉鸡肉杂麻鸡等肉用鸡群的诊断情况

常常能从肉用鸡群中测到H5和H9病毒。由于肉用鸡群常不做禽流感的疫苗免疫，肉鸡群的感染几乎可以说是自然发病。08年春有一户4000只AA肉鸡35日龄用胶体金试纸测到有大量的H5感染而无新城疫感染，四天内就全部死光了。该户当天就一个针头一只鸡打得H5疫苗，但也没有起上作用。据我们利用未免疫的小公鸡做的测定，在第七、八日龄打禽流感灭活苗，打苗后的第十天还测不到禽流感的抗体，到第十一天才能部分地测到抗体。

肉鸡群现在主要是H9亚型禽流感病毒的感染。主要表现为呼吸道症状和生长不良整齐度差，严重影响出栏。如果有新城疫混合感染，情况会更糟一些。在这种情况下，整群的大肠杆菌病和支原体病就可能闹得更厉害。有很多地方，现在肉鸡都养不成，养殖户损失很大，连带放鸡苗的鸡头和种鸡场相关工作都很难做。

目前山东河南辽宁的部分地区已有开始在肉鸡群中进行禽流感防疫的情况。但是这里有两个问题，一是油乳剂灭活苗保护期长达五六个月，而肉鸡却只饲养一个半月到两个月；二是在肉鸡出栏时鸡体上未吸收的油乳剂减少酮体的合格率。

1、5 新城疫的诊断

新城疫病毒的感染在家禽的胶体金诊断中占多数，主要的发病对象是商品代养殖场。如果是纯的新城疫感染且发病在早期，紧急接种常能取得较好的结果。从紧急接种的效果来看，进口疫苗的效果比国产的明显要好一些，而且副作用也少一些。进口苗用SPF蛋胚做苗可能是产品质量好一些的原因之一。

兽医将禽流感感染当成新城疫感染来紧急接种是造成鸡群重大伤亡和“医患”纠纷的重要原因之一。如石家庄某县一户3000只180日龄的鸡群发病死了几只鸡，兽医认为是新城疫，让户里8倍量打了Ⅰ系，打苗后鸡群出现大量死亡，三天后鸡群中只剩下5只活鸡！从死亡鸡的气管和肠道十二指肠小肠中段淋巴集结肿肿出血溃疡部位利用胶体金试纸能测到禽流感病毒而测不到新城疫病毒。这是一起典型的诊断错误，当然兽医也不是故意这样做的。

还有的养殖户一见降蛋或死鸡，就先三四倍量饮饮Ⅳ系，结果是降蛋更多，死鸡也更多。如果是新城疫感染，鸡群会在几天后好转；如果是纯禽流感病毒感染，用Ⅳ系做苗，反而会加重病情。在后一种情况下打Ⅰ系，损失会更大！

新城疫的疫苗株不能完全覆盖所有的分离毒株，意味着新城疫确有部分毒株发生了一些变异，表现在抗体水平很好的鸡群，仍有个别发病鸡。即鸡场“去不净”新城疫病毒。而在鸡群状态下降时，就有可能大群发病，种鸡场也为此非常“苦恼”！一些种鸡场已动手自己分离毒株做灭活苗来防治这种情况的发生，效果如何还需要进一步考察。

1、6  禽流感H5、H9与新城疫混合感染

在实际的诊疗过程中，禽流感与新城疫的混合感染还是有一定的比例的。不过无论是禽流感H5还是H9亚型与新城疫混合感染，都不能做新城疫苗的紧急接种，凡是做的，效果极不理想。如河北省邢台地区一户H9与新城疫混合感染，5000只35日龄蛋鸡做新城疫苗后死亡1500多只。

大部分的种鸡场新城疫防疫做得都比较好，抗体比较高。即使出现禽流感与新城疫混合感染，先做相应的禽流感防疫，八到十天后再做新城疫活苗的免疫也能取得好的效果。而商品代场常常新城疫抗体都不理想，一旦出现混合感染，则很难采取相应的措施，只有同时做禽流感油苗和新城疫油苗，但油苗抗体产生慢，常达不到理想的效果。如果直接用两种病毒的尿囊液灭活液即疫苗的水相部分就可能使抗体的产生时间大大提前了。

1、7 其它家禽的诊断

曾检测到以下情况：火鸡的禽流感H5与新城疫混合感染，孔雀的H9感染，鸭子的H9感染，只检测到鸽子的新城疫感染没有检测到禽流感感染且种鸽场也不做禽流感的防疫（鸽子对禽流感不敏感），能检测鸭子身上带有新城疫病毒且不表现眼观症状但个别例子提示新城疫病毒可能对种鸭的产蛋率有影响。

1、8 鸡胚中的测定

一些孵化场出现出雏率低出现一些死胚，在其尿囊液中能测到新城疫病毒和禽流感H5病毒。这是一些个别现象还是普遍现象？还是在某一阶段的现象比如发病后一段时间内的现象？普通的鸡蛋中是否也有这种情况？都需要做进一步的研究。

二、一点建议

对于禽流感的防控工作，现提几点不成熟建议：

2、1加在科研投入，可以有条件地放开禽流感的研究。科研不能垄断。垄断就意味着可能为了某种利益而没有进取。去冬江苏的情况就是很明显的例子。

2、2我国国家大，各地情况不一，千差万别，应每年春天在侯鸟来归时及时捕捉病禽并分离判断是否有新的变异的毒株，并围绕它早做相关工作，避免过两三年就来一次冬季大暴发。部分养殖密集地区可以在使用国家配发疫苗的前提下，配合使用当地分离的毒株做的苗。

2、3我国“小规模大群体”的饲养格局与相关的科学观念的缺乏是疾病控制的难度加大的主要原因。许多地方高密度养殖了几年，鸡数从几百万下降到几十万，兽医门市也从上百家下降到十几家，出现养场户与兽医门市“共进退，共存亡”的现象，就是养殖模式养殖观念与兽医观念落后的一种恶果。普及集约化养殖技术和新的兽医技术建立“防重于治”和“快速准确诊断”也成为当务之急。

2、4 对于肉鸡防疫，由于肉鸡生长周期短，可用油苗的水相免疫就行，这样一可以减少油相原料的使用且免疫期也够用，也减少油乳剂对酮体的破坏。同时这些水相还可以应用到蛋鸡疾病的控制上。因为我国的肉鸡最少有十几亿只，这对疫苗厂家来说，是能够考虑规模生产的。

（注：由于禽流感疫苗是油乳剂死苗，且为注射，毒株到达不了气管和肠道表面，所以从上述部位用胶体金试纸测到禽流感病毒即为野毒。新城疫抗原胶体金试纸对新城疫野毒和疫苗毒都能捕捉，一般做苗后五天内捕捉到的可能是疫苗毒，一般鸡群免疫应答正常的情况下，七天后就测不到疫苗毒了。如果一个鸡群半月或一个月没做苗，能测到新城疫病毒，一般都是野毒。另外新城疫疫苗一般不会引起新城疫病的典型病变，即使出现用苗七天内发病，也能通过剖检来帮助判断。

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