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实验室检测样品的准确性都依赖于送检样品质量和新鲜度,从根本上,反应了疾病爆发的真实情况,都与监测样品的采集、运输、保存等有直接的关系。任何一个环节都至关重要。
1. 样品的采集
1.1样本的采集方法
1.1.1尸体取样方法
尸体取样的部位主要有脑组织、喉头、口腔分泌物、气管、气囊、肝脏、心脏、脾脏、肺脏、肾脏、胰脏、关节液、输卵管及腹膜炎的干酪样物、法氏囊、变形的卵泡、肿瘤组织、泄殖腔、血液、肿胀的脚垫、伤口渗出物、肠道组织及内容物等。采用无菌操作,剖检动物,找到含毒量或含菌量高的组织,直接剪取完整的组织于灭菌试管或灭菌袋,如图一。
对于脓肿的关节,消毒后打开外皮组织,关节液可以直接用移液枪吸取,放入灭菌的离心管,如图二。
干酪物较多时,用灭菌的镊子取组织于离心管中。如果采取腹腔中不同器官中的血样时,用注射器吸取比较好,如图三。
1.1.2活体去取样方法
活体取样的样本主要有血清、鼻试子、肛试子、喉头试子、泄殖腔拭子、皮肤、羽毛、污染的饲料、水、粪便、垫料、灰尘及孵化场的绒毛和空气等。采血主要部位是心脏、颈静脉,翅下静脉等。颈静脉采血方法:用手指轻弹血管后,用酒精棉球反复涂擦局部使血管充盈怒张,术者左手握住鸡颈部如图四所示,然后用左手拇指按住针头结合部,缓慢抽取血液,如图四。
采血完毕,迅速拔出针头,局部用干燥棉球按压止血。用无菌棉签伸入体腔内采集深部样品,于灭菌的试管或灭菌带袋中送检。对于皮肤、羽毛、污染的饲料、水、粪便、垫料、灰尘及孵化场的绒毛和空气等采集,手术刀、剪等器材刮去或剪取组织,放入灭菌的试管中送检。
1.2 检测样品的采集注意事项
样品的采集主要包括病原样品的采集和血清样品的采集。病原的检测都要保证样品的新鲜,也就是以临阵死亡或刚刚死亡的典型病禽,如果运输不方便,最好无菌采集各部分器官。
1.2.1 检测病原样品的采集
(1)对采集病料的器械及容器必须提前消毒,以免对病料造成污染,导致检测结果不准确。对于采样后的尸体以及剖检场地要进行彻底消毒,避免造成二次散毒。
(2)采样所用刀、 剪要锋利,切割要迅速、准确( 忌拉锯式切割);还要防止挤压病料,以免人为造成组织病变。要有选择地采集病变典型的脏器和其内容物,兼顾病变和健康组织。
(3)采集样本时无需添加任何物质,直接放入灭菌的试管内或灭菌袋内。贴上标签以便保存。如做药敏试验时,送检前没进行药物治疗的,以免产生耐药性或结果不准确。
(4)对动物活体样品的采集, 应注意时效性和对采集物的不同要求。初步诊断为病毒感染的, 采集病料必须在发病初期、急性期或发热期进行。准备用作组织培养的鼻( 咽)拭子, 应保存于1ml0.5%乳蛋白水解液中; 要进行血清学检验的乳汁,不应冻结、加热或剧烈晃动;尿液的采集,宜在早晨进行。
1.2.2 检测血清样品采集要求
(1)采血器械要严格消毒,保持清洁、干燥,做到一畜禽一针头,不使用弯、带刺、 钝的针头,避免污染。采血部位按常规去毛消毒,待酒精挥发后再扎针采血。拔出针头后,也要用消毒棉球按压针眼,轻按止血消毒,以防感染。
(2)选用合适的针头及注射器。由于禽类动物的大小不同和各部位的静脉血管也不同,应选择合适的针头。针头过长、过粗、过短都不利于血液的采集。采血用的注射器有带有促凝剂和不带促凝集的一次性注射器。
(3)采血前要保定动物,以免动物出现打喷嚏、 咳嗽、 摆头、 发绀、 步态不稳、呼吸明显困难等症状,导致采集的血样量不够、污染,甚至伤到动物。
(4)采集的血样防止剧烈震荡,应贴上标签迅速让血液凝固,37℃2h即可析出的淡黄色的血清或室温倾斜放置 30min,以利析出血清。离心后取出血清以便保存。
2. 样品的运送与保存
(1)要求送检人员对动物的发病情况十分了解或有详实的记录,写明送检人、送检部门、送检人联系电话、送检日期、送检样品及数量、包装好并区分清楚,数量等等,以免误检、漏检。禽场的发病情况、导致的可疑因素,说明送检的内容与时间,需要检测的项目,或拟一份详细的检测报告单,便于检测快速进行。
(2)送检时, 除注意冷藏保存外, 还需将病料妥善包装, 避免破损散毒。供病毒检测的样品应在 0℃以下低温保存,也可用灭菌后的30%~50%的甘油生理盐水保存。也可以冷冻后,采用肉夹馍式包装和保温泡沫盒如图二。
不能及时送检的,尽量避免反复冻融。若系邮寄送检,应将病料放入泡沫盒里,最好在24h内能送达检测室。
(3)样品采集后要及时送检。不能及时监测的,要妥善低温保存。但保存时间过长,蛋白质分解代谢,甚至腐败、 变质,加之病原自身分解和死亡,导致监测浓度偏低,或者监测不到,疫病监测也就失去了预警意义。细菌病和血清的样品一般维持在4度左右。防止血液变质,送检过程中尽量防止剧烈振荡。血清样品若要长时间保存,则应将血清置于冰箱 -20℃冻存,但不可以反复冻融。
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