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研究增强了对肉鸡生长与发育障碍综合症的理解

2014/2/12 17:34:42 0人评论 1691次浏览 分类:专家在线

生长和发育障碍综合征(RSS)是一种肠道疾病,已在美国和其他国家有报道,根据美国佐治亚大学兽医学院的Holly S. Sellers 教授。

虽然RSS的描述最早可追溯到上世纪70年代,但是她说病因还有待确认。利用RRS感染肉鸡的肠道组织匀浆过滤物可以很好地复制这种病,这意味着这是一种病毒病。尽管已分离出几个新型病毒,但是临床疾病还没有复制出来。

我们实验室的宏基因组学研究已经确定了病毒序列,属于只在RSS+上存在的细小星状病毒家族以及未知来源的序列。此外,在感染RSS的鸡肠道中采用原位杂交检测出三个星状病毒,ANV-1,ANV-2和一种新的鸡星状病毒。具体来说,只有CkAstV特定的信号在囊性病变处被检测出,这意味着这种病毒标志性病变有密切的关联。将扩增的编码病毒衣壳蛋白和鸡的细小病毒克隆到真核表达系统并纯化用作实验疫苗。

与Boehringer Ingelheim家禽兽医诊断研究中心的Egbert Mundt 博士合作了一项由美国禽蛋协会发起的研究,他们解释了他们研究的三个具体目标。

目的1:生产基于克隆的重组蛋白并在已建立的杆状病毒表达系统上表达为基础的实验疫苗

一种新的鸡星状病毒(CAstV)纯化的免疫原性蛋白、禽肾炎病毒样病毒(ANV-1)、类似禽肾炎病毒2(ANV-2)和一个新的鸡细小病毒(CParvo)用作制备多价疫苗。

为免疫原性蛋白编码区,由CAstV衣壳蛋白基因编码,ANV-1、ANV-2和CParvo扩增、克隆并在杆状病毒上表达和纯化。纯化的衣壳蛋白与乳化油佐剂等体积混合乳化用作多价重组蛋白疫苗。此外,制备足量的纯化蛋白用于单个衣壳蛋白ELISA试剂盒以备血清学评价。

目的2:用CAstV、ANV-1、ANV-2和CParvo纯化蛋白组合物免疫接种肉种鸡并评估对后代的保护作用

在12和18周龄时接种重组蛋白/油佐剂疫苗观察单个衣壳蛋白的血清转化情况。

将接种和未接种疫苗的母鸡种蛋进行孵化,共进行七次。在所有7次接种疫苗的蛋孵出的后代在孵出时每个均有衣壳蛋白阳性的抗体。

挑战后5和12天时RSS挑战组和未挑战组在体重上表现显著差异,不论接种疫苗与否。然而,在1和3组的后代中,在挑战后12天接种/RSS挑战的鸡体重抑制小于未接种疫苗/挑战的鸡。

MCAP/RSS挑战组所有组的后代囊隐窝病灶平均数,不包括组3,均高于NEG/RSS挑战组,这表明在接种疫苗的仔鸡上病理反应加强。然而,MCAP/RSS挑战组的组3的后代中囊性病变比NEG/RSS挑战组低40%,这表明囊性病变有所缓解。

根据之前的研究,星状病毒衣壳蛋白的抗体能通过降低病灶总数以及降低体重抑制的水平而减轻该病。

添加ANV-1、ANV-2和CParvo衣壳蛋白到星状病毒衣壳中没有缓解临床疾病,在某些情况下在挑战后还可能加重了疾病。

目的3:给商业肉仔鸡胚胎用制备的纯化重组蛋白制剂进行卵内接种

使用的纯化重组蛋白制剂如下:

  1. CAstV/ANV-1/ANV-2/CParvo
  2. ANV-1/ANV-2/CParvo
  3. CAstV/ANV-2/CParvo
  4. CAstV/ANV-1/CParvo and
  5. CAstV/ANV-1/ANV-2.

在14或18日龄卵内接种疫苗的处理组没有发现具有保护作用。事实上,在胚胎发育14日龄对ccCkAstV和无菌PBS组进行卵内注射疫苗发现孵化率显著降低,这表明孵化率降低可能与接种的时间有关。

因为Intelliject 机器是用于18日龄的胚胎接种,因此可能对机械注射要进行一些变动。

单独ccCkAstV在14或18日龄进行卵内接种似乎并没有影响到21日龄的体重。然而,当在14日龄卵内接种时,未挑战组在接种5天后11%的鸡有囊性病变,这表明病毒能引起小肠绒毛的病理变化。

ccCkAstV的减毒可能能用来减少未挑战鸡的的病变;然而,目前尚不清楚这是否会减轻临床疾病。

星状病毒的免疫机制还不是很清楚。该病毒是在进栏6小时后鸡暴露于RSS污染的垫料环境下时在其小肠绒毛上被检测出,从而限制了传统疫苗接种策略。

抗RSS保护性免疫力可能不主要是体液水平的还有粘膜和细胞水平的调节。

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