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禽白血病病毒（ALV）是一种主要通过种鸡的种蛋垂直传播的致肿瘤性病毒。发达国家一直高度重视种鸡群ALV的净化，经过多年的努力，世界上主要家禽育种公司在上世纪80年代末就已将经典的A、B、C、D亚群ALV感染基本净化。针对上世纪80年代末新出现的ALV-J，又经过15年的努力，在绝大多数商业化运作的大型种鸡公司，也已得到了基本净化。

近几年来，常常有种鸡公司咨询如何开展种鸡场的净化。参考国际上的成功经验和过去多年工作的经验教训，拟定了种鸡场禽白血病净化的原则方案，供相关单位参考。

由于我国不同地区饲养着不同类型的鸡，如快大型白羽肉鸡、蛋用型鸡、培育型黄羽肉鸡和不同特色的地方品种鸡，其中有的是依靠进口祖代鸡繁育大量的商品代或从其他公司引进祖代鸡或父母代种鸡，有的则完全是我国自繁自养的原种鸡群。对这些不同鸡群，ALV净化要求的程度是显著不同的。对我国自繁自养的原种鸡群，不论是什么类型的鸡，都应实现彻底净化。对于曾祖代至祖代或以下代次的鸡，目前只要求将感染率降低到不引起明显临床病变就可以。以下将分别加以叙述和介绍。

1 自繁自养的原种鸡场核心群的净化程序和方法

不论单一品系的原种鸡场还是具有多个配套系的原种鸡场，所谓原种鸡场是指不再从其他来源引进新的种鸡、仅从先有的鸡群种选育的在种源上封闭繁殖育种的鸡场。对这样的鸡场（群）才需要或值得采用这一最严格的净化程序。

1.1 出壳雏鸡胎粪检测和淘汰阳性鸡

在出壳前，将每只种鸡的种蛋置于同一出壳纸袋中，用棉拭子逐只采集1日龄雏鸡胎粪，置于小试管中。在对一只母鸡的雏鸡采集完胎粪后，

必须更换手套，或彻底洗手消毒。用ALVp27抗原ELISA检测试剂盒对1日龄胎粪检测p27抗原（具体操作方法见附件）。需要注意的是，同一只母鸡所产雏鸡中，只要有一只阳性就应淘汰同纸袋中的其他雏鸡，同时淘汰相应种母鸡。

对选留的雏鸡，以母鸡为单位，同一母鸡的雏鸡放于一个笼中隔离饲养。每个笼间不可直接接触，包括避免直接气流的对流。饲养期间要采取避免横向传播的各种措施。

对选留鸡选用的所有弱毒疫苗，必须经严格检测，绝对保证没有外源性ALV污染。

1.2 6周龄育雏后期采集血浆分离、检测病毒血症和淘汰阳性鸡

育雏期结束时，按育种规程对后备鸡做性状观察，淘汰在性状上不合格个体。对保留的鸡逐只采集血浆，接种DF-1细胞分离病毒。培养9d后用ALVp27抗原ELISA检测试剂盒逐空检测p27抗原或用IFA逐空检测感染细胞（具体操作方法见附件）。淘汰阳性后备鸡。在同一母鸡的同一饲养笼中，只要有一只阳性就应淘汰同笼中的其他后备鸡。

对经以上选留的后备种鸡，可适当合群维持小群隔离饲养。例如，每群20~50只左右，可根据后备种鸡的总体数量视条件而定。

1.3 23－25周龄留种鸡开产初期检测和淘汰

初产期属于鸡群禽白血病病毒排毒高峰期，因此逐只取初生蛋3个一一编号，对蛋清用ALVp27抗原ELISA检测试剂盒做p27抗原检测，淘汰阳性鸡。公鸡可采集精液检测p27抗原，淘汰阳性鸡。其余鸡随即采集血浆接种DF-1细胞分离病毒，培养9d后用ALVp27抗原ELISA检测试剂盒逐空检测p27抗原或用IFA逐空检测感染细胞。淘汰阳性种鸡。同一小群中，如有一只为阳性，淘汰该群所有鸡（在感染严重的鸡群，这一条在净化的第一世代可酌情处理）。

1.4 40－45周龄留种前检测和淘汰

取2~3个种蛋对蛋清做p27抗原检测，淘汰阳性鸡。公鸡可采集精液检测p27抗原，淘汰阳性鸡。其余鸡随即采集血浆接种DF-1细胞分离病毒，培养9d后用ALVp27抗原ELISA检测试剂盒逐空检测p27抗原或用IFA逐空检测感染细胞（具体操作方法见附件）。淘汰阳性种鸡。

1.5 种蛋的选留和孵化

在经以上“四”项留种前检测淘汰阳性鸡后，每只母鸡仅选用1只检测阴性公鸡的精液授精。按规定时间留足种蛋，每只母鸡的种蛋均标号。在出壳前，将每只母鸡的种蛋置于标有母鸡号的一个专用纸袋中，置于出雏箱中出雏。

1.6 第二世代鸡的检测和淘汰

对经上述“一”到“五”步检测淘汰后种鸡的出壳的雏鸡，作为净化后第二世代鸡。继续按“一”到“五”的程序，实施第二世代的检测和净化。第三世代后可按此程序继续循环进行。

1.7 检测阳性阈值的调整

在全群不再检测出阳性，或阳性率很低时，可酌情调整在ELISA中判定阳性的p/s阈值，从严淘汰。

1.8 净化程序启动时期的选择

以上程序为一个世代的全部过程，但各鸡场可以根据净化计划实施开始的时期不同，可以从不同的阶段开始。

1.9 净化状态的维持

实施上述完整的对核心群鸡逐一检测和淘汰的程序，工作量很大、成本也很高。根据国外成功的经验，当一个核心群连续3~4个世代都检测不出ALV感染鸡后，可转入维持期。在进入维持期后，就不需再对每只后备鸡逐一做上述所有检测步骤。可改为对一定比例鸡的定期抽检，例如5%左右。而且也不一定要用细胞培养分离病毒，仅仅采用操作上比较简单的检测胎粪和蛋清的p27抗原。当然，在这方面还没有直接经验，还有待于今后逐渐摸索和成熟。

2 、引进的祖代或父母代种鸡场的净化

不论种鸡是哪种类型、是从国外引进还是国内其他公司引进，都属于这一范畴的种鸡场。这类种鸡场对ALV的净化只是广义含义上的净化。实际上，他们只需要做到选择净化的种源和监控并维持引进种鸡群的净化状态。我国大多数祖代鸡场都属于这一净化范畴。

2.1 选择净化的种源

这要根据提供种鸡的育种公司的信誉度、历年引进的种鸡的实际净化状态、其他用户的反映来做出判断。对新的供应商育种公司，可要求对其曾祖代鸡群或祖代鸡群采集一定数量血清样品（100~200份）检测抗体，确认都为阴性，或更有可操作性的是要求其提供初产种蛋检测其蛋清p27抗原（100~200个）及出壳雏鸡的胎粪p27抗原。

2.2 定期检测和监控引进种群的感染状态

可定期抽检（1%左右）血清样品的抗体状态及种蛋蛋清p27抗原。

2.3 净化状态的维持

注意严格防止引入其他来源的鸡。严加防止使用被外源性ALV污染的疫苗。

3 、小型自繁自养黄羽肉鸡或地方品种的种鸡群的净化

鉴于现在我国大多数自繁自养黄羽肉鸡或地方品种的种鸡群都已不同程度地感染了ALV-J和（或）其他亚群外源性ALV，有的已发生临床病理表现并造成明显经济损失。这些种鸡群公司有的规模很大，品系集中，可以考虑采用上文“自繁自养的原种鸡场核心群的净化程序和方法”建议的净化程序，采用最完整最严格的检测淘汰程序。但大多数此类公司的规模和经济实力还不够大，可能无力承受该净化程序的成本和代价，更没有技术力量和条件做细胞培养分离病毒。这时可采用相对简化的检测淘汰程序作为过渡期。这只能尽量减少感染率，从而减少对后代的垂直传播性和相应的经济损失。在这类种鸡场，可仅仅采用“自繁自养的原种鸡场核心群的净化程序和方法”步骤的“1.1”和“1.3”，即仅对雏鸡出壳后做胎粪p27抗原检测及对种蛋蛋清做p27抗原检测。或者更简单地只检测种鸡种蛋蛋清p27抗原。但这只能作为不得已的过渡期，长此以往也会被市场所淘汰。

附件：种蛋选留和孵化出雏的注意事项

●种蛋入孵

入孵前准备：种蛋在入孵前进行熏蒸消毒。

入孵数量估算：种蛋入孵数量和批次决定于所选择的鸡种受精率和孵化率。如果按照一个批次入孵，830只阴性鸡可收集490个蛋/d推算，连续收集15d内所产种蛋才能保证430只公雏和2200只母雏的出雏量，从而确保备选检测要求。推算依据如下：7500个蛋×80%（受精率）×80%（孵化出雏率）×45%（出母雏率）≈2200只母雏

●一世代出雏初检

初检前准备：雏鸡出雏后，纸袋从孵化器拿出，及时放入检测室待检，确保检测室温、湿度符合要求。

初检时间：出雏后24~36h以内完成。

初检方法：一个纸袋内的雏鸡胎粪样品分别应用ELISA试剂盒对p27抗原进行检测，胎粪样品采集与雌雄鉴别同时进行。

其它事项：采样应在接种马立克疫苗前进行。

处置方式：淘汰阳性鸡及对应纸袋内所有雏鸡，阴性鸡进育雏室隔离饲养。

●净化关键控制点

对基因库地方鸡种实施禽白血病检测与净化，除了要严格按照以上设计的检测与净化流程和操作细则执行外，还要对生产实际若干环节加强管理与控制，特别是孵化、出雏和接种疫苗等关键点，以确保获得良好的净化效果。孵化环节的控制：孵化厅是造成鸡禽白血病

水平传播的重要场所，因此对孵化环节的控制至关重要，需从细节入手，阻断一切可能造成水平传播的途径。因此，基因库净化鸡种种蛋的孵化要使用专用的孵化厅、孵化器和出雏器。

种蛋运输：种蛋运输要做到专人、专车运输。

种蛋管理：种蛋库在进种蛋前，先进行0.05%铵福喷雾，再进行一次严格的熏蒸消毒。进入种蛋库人员必须经过沐浴并更换消毒合格的防疫服方可进入；孵化盘经0.05%铵福消毒液浸泡消毒，并用甲醛熏蒸30min后才可使用；孵化车应彻底冲洗干净，并用0.05%铵福喷雾和甲醛熏蒸；电子秤必须经过甲醛熏蒸方可放入。除专门规定人员外，其他任何人员严禁进入种蛋库。种蛋库隔天用甲醛加热法熏蒸40min。每天用1%次氯酸钠消毒液擦拭地面，并用0.03%瑞特杀喷雾消毒一次。所有规定人员在进入种蛋库时必须踩踏消毒盆，用消毒药液洗手消毒，药液为0.05%铵福。设专人单独挑选和码放种蛋，并详细记录。

种蛋入孵：设专人装车并记录。种蛋入孵无需预温。在种蛋入孵前将孵化机彻底冲洗干净，0.02%瑞特杀喷洒消毒，并用甲醛熏蒸；每天使用专用消毒泵对孵化室用0.03%瑞特杀喷雾消毒一次,地面每4天用1%次氯酸钠擦洗一次，并泼洒少许甲醛。

落盘验蛋：确定出雏室、出雏器干净无菌，对出雏室、出雏器、落盘验蛋等用具，先用0.02%瑞特杀喷洒消毒，并用甲醛熏蒸。设计专用出雏袋，按照1只母鸡后代的全同胞进行装袋落盘，每袋装5个左右胚蛋。

出雏前准备：出雏前，将出雏场地及各种用具全部用0.02%瑞特杀喷洒消毒一次，并按每立方米加入28mL甲醛和14g高锰酸钾熏蒸消毒1h以上。

出雏技术要求：采用1只母鸡后代的全同胞一个袋子进行孵化，使每一个母鸡的后代入孵开始到出雏结束与其他母鸡后代完全隔开，直到检测结束后，才使阴性鸡只与环境接触。即将1只母鸡所产下的种蛋装入1个纸袋，纸袋厚度0.15mm，规格22cm×18cm，袋身有12个通气孔。将12个纸袋放入一个出雏盘。为避免纸袋底部光滑伤害雏鸡腿脚，在纸袋底部加一层防滑纸垫。使用纸袋出雏，必须同时加大通风，防止由于通风不畅，造成雏鸡窒息死亡。采用该技术，既可保证雏鸡质量，又可减少疾病的水平传播。

挤胎粪：进行禽白血病净化，需要对雏鸡进行胎粪检测，检测结果为阴性的鸡只才允许上笼。由鉴别人员负责按照1只母鸡后代的全同胞逐个进行挤胎粪，每挤完一袋，消毒一次，并做好记录。

带翅号：由专人负责发翅号、专人记录、配带翅号，每带完一袋必须洗手消毒一次。

装袋存放：带完翅号后，将雏鸡装入新的袋内，并做好标识与记录。存放温度为25℃左右的环境下。

淘汰：为确保鸡群质量，做到严格净化，若1只母鸡后代的全同胞中有1只鸡检测为阳性，则将整个全同胞及对应的母鸡淘汰，并做好记录。

雌雄鉴别：雌雄鉴别是可能造成交叉感染的主要环节，为了防止交叉感染，每鉴别完一袋，用新洁尔灭洗手消毒一次。

免疫：出壳雏鸡免疫的马立克疫苗必须进行外源病毒检测，检测合格后方可使用。每免疫完一只母鸡的后代，洗手消毒并更换针头一次。为确保疫苗质量，所用的疫苗在使用前进行质量控制，活疫苗多使用国外产品。无论是活疫苗还是灭活苗，在使用前每批都要进行抽样检测，确保合格后方可使用，防止外源性禽白血病病毒及其它病毒污染。免疫过程中使用无针头注射器，免疫器具在使用前彻底消毒。免疫过程中严禁免疫人员和免疫用具之间的交叉污染。

传染源的控制：阳性鸡及其粪便是重要的传染源，因此无论是在进雏或转群前都必须通过检测，有效地检出阳性鸡只并将其淘汰，这是杜绝病原体进入养殖场的重要手段。只有保证新进鸡群为病原体阴性鸡群才能将其运输到饲养场，确保饲养场远离病原体。

传播途径的控制：禽白血病虽然为垂直传播疾病，但防止其水平传播同样重要，尤其是育雏期的前两周。做到最大限度的隔离是行之有效的方法，育雏和育成阶段采取按家系上笼，小群饲养。蛋鸡阶段采取单笼饲养，跟踪检测。饲养设备的创新利用：饲养阶段，笼位、饮水器、料槽、粪盘都要做到单家系独立使用，同时笼位大小和位置的设计既要保证净化各阶段鸡群容纳数量，又要保证不同家系间“只闻其声，不见其面”，防止禽白血病水平传播。

转群：转群前进行外型选择和病原检测，及时淘汰阳性鸡。转群人员提前入场进行隔离，减少外来病原体的侵入。每笼鸡在转群的过程中都经过独立操作，每转完一只鸡，操作人员需进行洗手消毒，转群设备也要进行消毒。转群时，采用隔离良好的转雏车，每运完一车都要进行彻底消毒。

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