鸡鸭鹅病防治网分享：中和抗体在PRRSV免疫保护中的作用

一 PRRSV感染后,事件发生顺序： 
1病毒血症－急性感染期
与病毒接触后，进入病毒感染初期，感染猪出现临床症状，病毒在肺泡和其他组织巨噬细胞中大量复制，出现病毒血症，持续长达30天。并且早期抗体的产生，对于病毒血症的缓解没有明显的效果。从图中曲线可以看出，只有当中和抗体开始产生后，病毒血症才逐渐消失。
2组织中的病毒量
在急性感染期，病毒在特定组织中大量复制繁殖，持续大约1个月后，进入到持续感染期，病毒在机体特定部位维持低水平的复制，持续排毒，能感染其它动物。病毒从机体完全清除至少需要150天甚至更长时间。随着抗体的出现，组织中的病毒量逐渐下降。尤其是中和抗体和细胞免疫出现之后，组织中的病毒逐渐降低，并最终被完全清除。
3总抗体（ELISA方法检测）
病毒感染机体以后，抗体可以在感染后7-9天用Elisa方法检测到，免疫过氧化物酶单层细胞试验和间接免疫荧光抗体均可检测到血清转阳。研究表明，感染早期出现的抗体是由核衣壳蛋白，M蛋白和GP5蛋白诱导产生，与抗体依赖性增强效应有关。将这些抗体用于被动保护实验，证实其不能对机体产生保护作用，属于非中和抗体。从图中可以看到，总抗体在感染后1-2个月达到高峰期，随后逐渐下降，并可以在体内存在超过1年时间。
4中和抗体
中和抗体是由适应性免疫应答细胞分泌的一种可溶性蛋白。病毒侵入机体之后，免疫细胞把中和蛋白分泌到血液里，后者与血液里的病毒颗粒结合，阻止病毒感染细胞，破坏病毒颗粒，这样就把病毒“中和”掉了。中和抗体是真正有免疫保护作用的抗体。
研究表明，PRRSV的中和抗体产生的比较晚，一般在感染后3-4周左右才产生，1至2个月才达到高峰期，随后快速下降。由于中和抗体产生的明显滞后性，导致使机体内的病毒不能及时有效被清除，从而在机体内大量繁殖并且排毒感染其它动物。 
为什么PRRSV中和抗体产生会延迟？
PRRSV最主要的中和表位－ECN，位于GP5蛋白37-44位氨基酸，此区域可以被中和单克隆抗体和在被动转移实验中使用的高度保护PRRSV抗体识别，即能诱导产生中和抗体。与ECN相距7个氨基酸的位点有一个非中和免疫表位—IDE, 其存在以及ECN周边的糖链均可能会阻碍ECN被B淋巴细胞识别，从而不能产生中和抗体。这应该是之前有文章报道关于中和抗体难以检测到的原因，也是PRRSV免疫逃逸的主要机制。
5 IFN-r产生细胞（提示细胞免疫作用）
IFN-r由抗原刺激T细胞分泌，具有抗病毒、抗增殖活性外，其主要生物学活性为免疫调节作用。跟中和抗体的曲线一样，IFN-r产生细胞的出现也表现出明显的滞后性，这是因为在PRRSV感染机体之后，诱导产生IL-10，从而下调了T细胞的应答。
持续性感染是PRRSV流行病学的重要特征，病毒可在感染猪体内存在很长时间。从PRRSV感染事件图中可以看到，PRRSV感染后, 病毒血症可持续长达30天，而组织中的病毒可以维持150天甚至更长时间。这主要是由于保护性细胞免疫和中和抗体产生的滞后性，使机体内的病毒不能及时有效被清除。  待中和抗体和保护性细胞免疫开始产生以后，病毒血症开始消失，并且随着中和抗体和细胞免疫水平的升高，组织中的病毒载量也逐渐下降，并最终完全把病毒清除出体内。
从上图也可以看出，病毒的清除跟总抗体没有直接相关，主要跟中和抗体和细胞免疫有关。但是，这两种免疫保护机制产生都有滞后性，因此造成了蓝耳病毒的持续性感染。
二 PRRSV的理想疫苗 
针对PRRSV的特点，能在短时间内诱导产生高水平的中和抗体和特异性细胞免疫应答的疫苗是PRRSV最理想的疫苗。开发出此类疫苗是PRRSV疫苗的主要研究方向: 
1、诱导中和抗体产生
前面提及，由于蛋白结构产生的位阻作用，PRRSV主要中和表位不容易被识别，从而导致中和抗体产生慢且不容易被检测。针对这一现象，有研究人员通过去掉附近的糖基化位点或者是另一个免疫表位，使中和表位暴露从而容易被识别，可以观察到中和抗体和保护水平有一定程度的提高。有研究指出，能诱导机体产生滴度为1:32的中和抗体的疫苗，可以对猪产生有效保护。
2、提高细胞免疫水平
树突状细胞的靶向技术运用到PRRSV疫苗的开发，可以靶向提呈病毒抗原，使免疫系统第一时间作出反应，让PRRSV无处可逃。
抑制PRRSV诱导的调节性T细胞效应，如在免疫前先注射相关免疫调节因子抗体，阻断免疫抑制效应的通路，提高细胞免疫作用，从而有效提高疫苗的效力。
3、蓝耳疫苗的现实
蓝耳病的灭活疫苗已经被证实效果不太理想，只有蓝耳活疫苗经过十几年的使用验证，对于蓝耳病的防控确实有效果。但是蓝耳活疫苗一般都是通过将野毒株在敏感细胞上连续传代致弱而制备的，因此其仍然保留了蓝耳野毒的免疫特点，即弱毒疫苗免疫后不可能立马就产生可以提供免疫保护的中和抗体和细胞免疫水平，其同样需要3-4周时间才能产生足够的免疫保护力。
     2015年5月份由中国兽医药品监察所和广东永顺生物制药股份有限公司合作研发的高致病性蓝耳病活疫苗（GDr180株）上市。GDr180株虽然上市时间最晚，但是经过九年时间的研发历程，对GDr180株的特点研究的非常透彻，其传代次数高、安全性好、不会散毒、免疫效果理想，对于高致病性蓝耳和类NADC30变异蓝耳毒株均可以起到很好的免疫保护效果，是目前规模猪场控制猪蓝耳病的一个主要选择。但是，疫苗再好，如果用法不当，效果也会大打折扣。俗话说得好，好钢要用在刀刃上！GDr180株疫苗免疫后产生充分的中和抗体和细胞免疫同样需要3-4周时间，因此在制定免疫程序的时候，一定要保证在发病前3-4周免疫，只有这样，GDr180株这个好疫苗的完全功效才能充分发挥。

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